L’immobilisation d’Acétylcholinestérase sur Silicium/ Silicium poreux fonctionnalisé.

Abstract

Ce travail de thèse a été consacré à l’immobilisation d’Acétylcholinestérase à la surface de silicium plan et de silicium poreux (SiP) pour l’étude de l’activité enzymatique par voie électrochimique et par spectroscopie UV-Vis des surfaces obtenues et ce dans la perspective de développer des dispositifs pour la détection électrochimique des organophosphorés en solution. Les substrats de SiP mésoporeux ont été élaborés par voie électrochimique. Les surfaces de silicium H-Si(111) atomiquement planes ont été préparées dans NH4F, et les surfaces de silicium SiHx rugueuses ont été préparées dans l’HF. Par la suite la modification de ces surfaces par l’enzyme AChE a été réalisée en suivant un procédé multi-étapes compatible avec les méthodes douces requises pour l’accrochage de ces molécules sans les endommager. Nous avons examiné en temps réel l'immobilisation de l'enzyme acétylcholinestérase (AChE) sur une surface activée à l'aide de spectroscopie IR en réflexion totale atténuée géométrie (ex situ et in situ). La quantification des enzymes immobilisées a été réalisée en utilisant la spectroscopie FTIR en exploitant les deux bandes de vibrations spécifiques et dominantes (amide I et amide II) associés aux groupes amides. L'activité enzymatique évaluée par la spectrophotométrie UV / Vis a été conservée pour les différentes surfaces préparées. Enfin, la nouvelle méthode de la détection ampérométrique proposée est rapide, sensible et montre une bonne relation linéaire et une faible limite de détection dans la détermination de l'inhibiteur de l'enzyme. La méthode utilisée, nous a permis de déterminer la quantité des enzymes immobilisées et de déterminer la constante de Michaelis.