ETUDE DE L'INDUCTION DE L'APOPTOSE ET DE SES MECANISMES SUR LA LIGNEE HT29 PAR LE TRAITEMENT DE LA CAMPTOTHECINE ET DE L 'HOMOCAMPTOTHECINE

Abstract

PH 31 CPT'- i J (CPT) S3I Yjj-f3 (hCPT) S44I ~L i1J • LJl i CPT 91 y- €*: '- j i pHJI JUW hCPT j CP1'LJ- fl b) HF29 j .}-1T29 . CPT »i 1i'i, hCPT 2JI L HT29 1 IIU t; u1i , uii , u J .hCPT -il CP1'jU HT29 t'À& ùl L HT29 Jti Bd-2 IjI 1ui L U .BcI-2jj t1 u i Bidj j caspase-8 .i i j' Fas C,ui= ) HT29 tÀ. '• CPT Y 1 jlIji j j JcïZLL 'HT29 ûU J€+ Résumé La camptothécine (CPT) est un inhibiteur de Iopoisomérase I dont la cytoloxicité est réduite car l'hydrolyse de son cycle a-hydroxylacwne E en forme de carboxylate, est rapide en milieu aqueux à pH physiologique. L 'homocamptothécie (h(,'PT) possède un cycle fi-hydroxylactone qui lui confère une plus grande stabilité et présente une cytotoxicité supérieure à celle de la CPT Bien que les lignées colorectales soient fortement résistantes à la chimiothérapie, la CPT el la hCPT sont particulièrement actives sur la prol ifération des cellules HT-29. La hCPT induit une apoplose plus importante que CPT dans cette lignée. La régulation de l'expression des gènes et des protéines pro et anti-apoptotiques a été mise en évidence. D'une manière globale, les cellules HT-29 répondent de manière identique aux traitements par la CPT ou la hCPT L'effet protecteur de Bd-2 dans I 'apoptose induite par la CPT a été étudié. Bd-2 n'est pas exprimé dans les cellules HT-29. Des cellules HT-29 transfectées par le gène Bd-2 ont été utilisées pour préciser le rôle de Bd-2. Cette protéine protège les cellules vis-à-vis de I 'apoplose induite par la CPT. Enfin, l'étude de l'induction de I 'apoptose par la CPT, dans les cellules HT-29, montre que la voie Fas via l'activation de la caspase-8 et le clivage de Bid n'est pas impliquée dans le processus apoptotique. MOTS- CLES: camptoihécine, homocamptothécine, apoptose, cancer, cellules HT29, RT-PCR, Western Moi, spectroscopie, culture cellulaire et microscopie de fluorescence. Summary Camptothecin (CPT) is a topoisomerase I inhihiior whose cy!otoxicity is reduced due 10 the rapid hydrolysis of the a-hydroxylactone E cycle to carboxylate in aqueous medium at physiological pH. Homocamptothecin (hCPT) has a /3-hydroxylactone structure which confers a better stability and a higher cytotoxicity than CPT. As the human colorectal ceil line (HT-29) has a high resislance to chemotherapy, CPT and hCPT inhibit HT-29 ce!l prolifération. hCPT haî a more apoptotic effect than CPT in this lineage. The regulation ofgene expression coding for pro and anti-apoptotic protein has been reported. Overal!, HT-29 ceils respond equally w CPT or hCPT trearmen!. The protective effeci of Bd-2 in the apoptotic mechanism induced by CPT has heen investigated Bd-2 is not expressed in HT-29 cell line. HT-29 cells transfected with the Bd-2 gène have heen used to identjfy the role of Bd-2. This protein prolects the ceils against apoptosis induced hy CPT. Finally the study of the apoptosis induced by CPT in the HT-29 ce!l line shows that the signalling Fas pathway via the activation ofcaspase-8 and the dleavage ofBid is not involved in the apoplotic process. KEV WORDS: camptothecin, homocamptothecin, apoptosis, cancer, H729 cells, RT-PCR, Western Biot, spectroscopy, ce!l culture andfluorescent microscopy.