Caractérisation génétique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR) des souches de Staphylococcus aureus d'origine hospitalière

Abstract

Staphylococcus aureus est un agent pathogène majeur de l’homme, impliqué dans 1 à 5% des infections communautaires et jusqu’à 30% des infections acquises en milieu hospitalier (infections nosocomiales). Le traitement des infections à S. aureus est de plus en plus difficile en raison de la prévalence élevée des souches multirésistantes aux antibiotiques. Staphylococcus aureus est l'un des plus importants pathogènes humain associés à l'hôpital et acquis communautaire des infections. En raison de son importance clinique, une mauvaise identification des cet agent pathogène dans des échantillons cliniques peut avoir des conséquences graves tel qu’une augmentation de la morbidité et de la mortalité. Nous rapportons ici le développement d'un protocole de PCR classique pour le diagnostic d’infection staphylococcique collectés à partir du centre hospitalo-universitaire de Tlemcen .Le protocole a été conçu pour détecter toutes les espèces de Staphylococcus aureus à l'exclusion d'autres bactéries pathogènes (sur la base des amorces correspondant à des régions spécifiques de Staphylococcus aureus, le gène nuc). Des amorces oligonucléotidiques synthétiques, ont été utilisées dans la chaîne de la réaction par polymérase (PCR) pour amplifier une séquence du gène nuc, qui code pour la nucléase thermostable de Staphylococcus aureus. Un fragment d'ADN d'environ 282 pb a été amplifié à partir des cellules des souches cliniques de S. aureus .L'amplification n’a pas été enregistrée pour une autre espèce (Staphylococcus hominis) La technique PCR combinée avec la méthode d'extraction de l’ADN dans cette étude est un moyen rapide, simple et fiable .Cette stratégie pourrait être utile dans les laboratoires de routine pour évidement soutenir l’antibiothérapie des infections. Mots clés : Staphylococcus aureus, infections nosocomiales, identification, PCR, amorces, gène nuc, extraction de l’ADN. Abstract Staphylococcus aureus is a major pathogen of man involved in 1-5% of community infections and up to 30% of hospital-acquired infections (nosocomial infections). Treatment of S. aureus is becoming more difficult due to the high prevalence of multidrug-resistant strains to antibiotics. Staphylococcus aureus is one of the largest hospital-associated and community-acquired infections human pathogens. Because of its clinical importance, misidentification of this pathogen in clinical samples can have serious consequences such as increased morbidity and mortality. We report the development of a standard PCR protocol for the diagnosis of staphylococcal infection collected from the university hospital of Tlemcen .The protocol was designed to detect all species of Staphylococcus aureus to the exclusion of other pathogenic bacteria (using primers corresponding to specific regions of Staphylococcus aureus, the nuc gene) Synthetic oligonucleotide primers were used in the sequence of the polymerase chain reaction (PCR) to amplify a sequence of the nuc gene, which codes for the thermostable nuclease of Staphylococcus aureus. A DNA fragment of about 282 bp was amplified from cells of S. aureus. The amplification has not been registered for another species (Staphylococcus hominis). PCR technique combined with the method of extraction of DNA in this study is a fast, simple and reliable .This strategy could be useful in routine laboratories for recess support antibiotic therapy for infections. Keywords: Staphylococcus aureus, nosocomial infections, identification, PCR, primers, nuc gene, DNA extraction. ملخص 5٪ من العدوى في المجتمع وتصل إلى 30 ٪ من - المكورات العنقودیة الذھبیة ھو الممرض الرئیسي للإنسان بحیث تشارك في 1 العدوى المكتسبة من المستشفیات (عدوى المستشفیات).ان علاج المكورات العنقودیة الذھبة أصبح أكثر صعوبة بسبب ارتفاع معدل انتشار السلالات المقاومة للمضادات الحیویة. المكورات العنقودیة الذھبیة ھي واحدة من أكبر مسببات الأمراض المرتبطة بالمستشفیات والعدوى المكتسبة من المجتمع. بسبب الأھمیة السریریة، عدم التعرف على ھذا الممرض في العینات لھ عواقب خطیرة مثل زیادة معدلات الاعتلال والوفیات. تم تصمیم ووضع بروتوكول للكشف عن جمیع أنواع المكورات العنقودیة الذھبیة التي تم جمعھا من المستشفى الجامعي لتلمسان. ویھدف البروتوكول لتشخیص عدوى المكورات العنقودیة و إقصاء البكتیریا الاخرى المسببة للأمراض (باستخدام بادئات المقابلة لمناطق . nuc معینة من المكورات العنقودیة الذھبیة،و ھي الجین nuc واستخدمت بادئات قلیلة النوكلیوتید الاصطناعیة في تسلسل تفاعل البولیمیراز لتضخیم تسلسل الجین للمكورات العنقودیة الذھبیة. thermonuclease والذي یرمز الى نقطة أساس من الحمض النووي عن 282 زق (زوج قواعد) تم تضخیمھا من خلایا سلالتین سریریة للمكورات العنقودیة الذھبیة. لم یتم تسجیل أي تضخیم لنوع واحد من البكتیریا غیر المكورات العنقودیة الذھبیة . طریقة سلسلة رد فعل البلمرة و استخراج الحمض النووي في ھذه الدراسة ھي استراتیجیة سریعة, بسیطة وموثوق بھا یمكن أن تكون مفیدة في المختبرات الروتینیة لدعم العلاج بالمضادات الحیویة. nuc الجین ,PCR كلمات البحث: المكورات العنقودیة الذھبیة، عدوى المستشفیات , تحدید الھویة, سلسلة رد فعل البلمرة